ИФА- Иммуноферментный анализ

ИФА (иммуноферментный анализ) используется для определения иммуноглобулинов, антигенов и гормонов.

Метод ИФА обладает высокой чувствительностью и специфичностью, которая составляет 90%. Материалом для исследования служит сыворотка венозной крови, взятой натощак. Основное достоинство этого метода — возможность определения инфекции и возможность прослеживать динамику развития процесса, на который указывает уровнь антител.

Недостаток — относясь к непрямым методам диагностики, он позволяет определить иммунный ответ организма на возбудителя, а не самого возбудителя.

Для диагностики венерических заболеваний (ЗППП) используются три класса иммуноглобулинов: G, A, M. Иммуноглобулины разных классов вырабатываются в определенной последовательности:

Первыми появляются Ig M- антитела. Как правило это происходит через 1-3 недели с момента заражения, как скоро появятся антитела зависит от инфекции и от особенностей человека. Появляются симптомы острой инфекции. Обнаружение Ig M- антител в анализе указывает на наличие острой фазы заболевания или на обострение хронических инфекционных заболеваний. Через месяц начинают вырабатываться Ig A- антитела. Основная часть которых концентрируется на слизистых оболочках, где реализуется их защитная функция. Последними появляются Ig G-антитела, как правило, на 4 неделю с момента заражения. После лечения хламидиоза, микоплазмоза, трихомониаза их уровень значительно снижается, так как иммунитет против этих заболеваний не развивается.

Однако следует помнить, что обнаружение иммуноглобулинов (IgM, IgG, IgA) указывает только на наличие антител, а не на наличие возбудителя.

Механизм реакции

В основе иммуноферментного анализа лежит иммунная реакция антигена с антителом, а присоединение к антителам ферментной метки позволяет учитывать результат реакции антиген-антитело по появлению ферментативной активности или по изменению ее уровня. В упращенном виде механизм реакции можно представитьследующим образом:

Первая реакция происходит между определяемым Ig (Ab) и очищенным антигеном возбудителя (Ag), фиксированным к поверхности лунок иммунологического планшета

Для выявления образовавшихся иммунных комплексов проводят вторую иммунологичесую реакцию, в которой в качестве антигена выступает связавшийся специфический Ig, а в качестве антител к нему — коньюгат, представляющий собой Ig (Ab) к соответствующему Ig человека, меченный ферментом -пероксидазой (K)

Далее происходит ферментативная реакция, катализируемая ферментной частью молекулы коньюгата. Субстратом данной реакции служит бесцветное вещество — хромоген, который в ходе реакции образует окрашенное вещество. Интенсивность окраски в лунке определенным образом зависит от количества содержащихся в пробе иммуноглобулинов.

После остановки реакции проводят фотометрирование лунок с помощью специальных приборов, для учета результатов используют специальные приборы. При сравнении со значений оптической плотности контрольных проб проводят математическую обработку результатов анализа. Чем выше оптическая плотност в данной ячейки, тем большее количество специфических антител содержится в пробе

При измерении оптическую плотности (ОП) жидкости в ячейке и сравнивании ее с контрольным образцом подсчитывается концентрация антител в единицах объема. Наиболее часто применяется подсчет результатов в единицах оптической плотности. Надо учитывать, что для каждой тест-системы есть свои показатели учета результатов и показатели нормы и патологии на которые надо ориентироваться при интерпретации результатов.

Как интерпретировать результаты ИФА

Исследование наличия и уровня антител различных классов в некоторых случаях помогает определить стадии инфекционного процесса

К сожалению, такое важное преимущество ИФА, как количественное определение антител не имеет большого значения в практической работе — т. е. не позволяет точно установить диагноз и не влияет на дозировку и сроки назначения лекарственных средств.